.png)
Patch clamp et voltage clamp
-
amy sarah fowler
- Membre
- Messages : 292
- Inscription : 15 oct. 2014, 16:27
- Filière : Aucune
Un pavé d'explication est en cours de rédaction, veuillez patienter s'il-vous plait.
https://www.youtube.com/watch?v=nlTCMp6gWZ8
https://www.youtube.com/watch?v=nlTCMp6gWZ8
Responsable matière UE3 bis à la retraite
"Les voyages forment la jeunesse"
<p style="text-align:right;">- Une cellule dendritique.
-
amy sarah fowler
- Membre
- Messages : 292
- Inscription : 15 oct. 2014, 16:27
- Filière : Aucune
Commençons par la technique de voltage clamp:
Le but de cette technique est de trouver la perméabilité de la membrane pour des ions, et de pouvoir surveiller l'évolution de ces perméabilités selon le potentiel de la membrane.
Dans le cadre de notre cours, on surveille l'évolution des perméabilités du sodium et du potassium.
De plus, cette méthode se base sur les relations mathématiques: U=RI (la différence de potentiel est égale au produit de la résistance par le courant transmembranaire) et G= 1/R (la conductance est égale à l'inverse de la résistance)
L'objectif est de trouver d'abord R pour ensuite retrouver G, la conductance des ions, c'est à dire leur capacité à traverser la membrane, où autrement dit, leur perméabilité.
On place des électrodes de part et d'autres de la membrane du neurone. Pour créer un courant électrique, on crée une différence de potentiel entre les deux électrodes. Cette différence de potentiel est choisie par l'expérimentateur. Par conséquent, l'expérimentateur connait déjà U. (il ne reste plus qu'à trouver I et R).
Ensuite, on peut mesurer I, le courant qui traverse la membrane.
A partir de U et I, on calcule donc R (U=RI)
Puis on calcule G (G=1/R), la perméabilité de la membrane aux ions. On peut également suivre la concentration de part et d'autre de la membrane pour mieux évaluer les mouvements des ions.
On peut alors suivre la perméabilité des ions, selon la tension qu'on a imposée à la base.
On observe que les membranes laissent plus ou moins passer les ions selon la différence de potentiel. On a compris plus tard qu'en fait cette modification de la perméabilité était due à des canaux voltage dépendant. Selon le potentiel de la membrane, ils laissent passer les ions.
Le but de cette technique est de trouver la perméabilité de la membrane pour des ions, et de pouvoir surveiller l'évolution de ces perméabilités selon le potentiel de la membrane.
Dans le cadre de notre cours, on surveille l'évolution des perméabilités du sodium et du potassium.
De plus, cette méthode se base sur les relations mathématiques: U=RI (la différence de potentiel est égale au produit de la résistance par le courant transmembranaire) et G= 1/R (la conductance est égale à l'inverse de la résistance)
L'objectif est de trouver d'abord R pour ensuite retrouver G, la conductance des ions, c'est à dire leur capacité à traverser la membrane, où autrement dit, leur perméabilité.
On place des électrodes de part et d'autres de la membrane du neurone. Pour créer un courant électrique, on crée une différence de potentiel entre les deux électrodes. Cette différence de potentiel est choisie par l'expérimentateur. Par conséquent, l'expérimentateur connait déjà U. (il ne reste plus qu'à trouver I et R).
Ensuite, on peut mesurer I, le courant qui traverse la membrane.
A partir de U et I, on calcule donc R (U=RI)
Puis on calcule G (G=1/R), la perméabilité de la membrane aux ions. On peut également suivre la concentration de part et d'autre de la membrane pour mieux évaluer les mouvements des ions.
On peut alors suivre la perméabilité des ions, selon la tension qu'on a imposée à la base.
On observe que les membranes laissent plus ou moins passer les ions selon la différence de potentiel. On a compris plus tard qu'en fait cette modification de la perméabilité était due à des canaux voltage dépendant. Selon le potentiel de la membrane, ils laissent passer les ions.
Responsable matière UE3 bis à la retraite
"Les voyages forment la jeunesse"
<p style="text-align:right;">- Une cellule dendritique.
-
amy sarah fowler
- Membre
- Messages : 292
- Inscription : 15 oct. 2014, 16:27
- Filière : Aucune
Pour le patch clamp:
Cette technique permet de mesurer le courant passant dans un seul canal ionique. Elle permet également de trouver le potentiel d'équilibre de l'ion passant par ce canal.
On applique, grâce à une électrode à l'extérieur de la cellule, une différence de potentiel.
Le canal étant voltage dépendant, si la différence de potentiel est suffisante, le canal va s'ouvrir, sinon, le canal reste fermé.
Tout au long de l'expérience, on mesure le courant I.
Si le courant I est nul, il peut y avoir deux raisons. Soit le canal n'est pas encore ouvert, il n'y a pas d'échange/ flux d'ion, soit on se trouve à une différence de potentiel où le flux sortant de l'ion est égal en intensité au flux entrant de l'ion. Pourquoi? Parce que le flux diffusif sera devenu égal en intensité au flux de migration électrique mais dans le sens opposé.
Cette définition correspond au potentiel d'équilibre d'un ion.
La différence de potentiel a ouvert le canal. Un flux diffusif Jd (entrant, si on parle du Na) va se mettre en place grâce à l'ouverture du canal, pour corriger la différence de concentration en ion de par et d'autre de la membrane.
Dans le même temps, un flux migratoire électrique Je (sortant si on parle du Na) va se mettre en place pour égaliser la différence de potentiel de part et d'autre de la membrane.
Si la différence de potentiel qu'on applique est égale au potentiel d'équilibre de l'ion, alors le flux diffusif sera égal en intensité au flux migratoire électrique mais dans la direction opposée.
Jd= - Je Le flux net est alors nul.
Donc concrètement dans l'expérience, on augmente progressivement la tension (différence de potentiel). En même temps que la tension augmente, le flux de migration électrique va lui aussi augmenter.
D'abord la tension est trop faible pour ouvrir le canal.
Ensuite, le canal est ouvert mais la différence de potentiel étant inférieure au potentiel d'équilibre de l'ion, le flux diffusif est supérieur au flux de migration électrique. Le courant est alors dans le sens du flux diffusif, c-à-d entrant.
Ensuite le canal est ouvert grâce à une différence de potentiel égal au potentiel d'équilibre de l'ion. Le flux diffusif est égal au flux de migration électrique. Le courant I est nul.
Enfin, le canal est ouvert mais la différence de potentiel est supérieure au potentiel d'équilibre de l'ion. Le flux de migration électrique devient alors plus grand que le flux diffusif. Le courant est alors dans le sens du flux de migration électrique, il devient sortant.
Cette technique permet de mesurer le courant passant dans un seul canal ionique. Elle permet également de trouver le potentiel d'équilibre de l'ion passant par ce canal.
On applique, grâce à une électrode à l'extérieur de la cellule, une différence de potentiel.
Le canal étant voltage dépendant, si la différence de potentiel est suffisante, le canal va s'ouvrir, sinon, le canal reste fermé.
Tout au long de l'expérience, on mesure le courant I.
Si le courant I est nul, il peut y avoir deux raisons. Soit le canal n'est pas encore ouvert, il n'y a pas d'échange/ flux d'ion, soit on se trouve à une différence de potentiel où le flux sortant de l'ion est égal en intensité au flux entrant de l'ion. Pourquoi? Parce que le flux diffusif sera devenu égal en intensité au flux de migration électrique mais dans le sens opposé.
Cette définition correspond au potentiel d'équilibre d'un ion.
La différence de potentiel a ouvert le canal. Un flux diffusif Jd (entrant, si on parle du Na) va se mettre en place grâce à l'ouverture du canal, pour corriger la différence de concentration en ion de par et d'autre de la membrane.
Dans le même temps, un flux migratoire électrique Je (sortant si on parle du Na) va se mettre en place pour égaliser la différence de potentiel de part et d'autre de la membrane.
Si la différence de potentiel qu'on applique est égale au potentiel d'équilibre de l'ion, alors le flux diffusif sera égal en intensité au flux migratoire électrique mais dans la direction opposée.
Jd= - Je Le flux net est alors nul.
Donc concrètement dans l'expérience, on augmente progressivement la tension (différence de potentiel). En même temps que la tension augmente, le flux de migration électrique va lui aussi augmenter.
D'abord la tension est trop faible pour ouvrir le canal.
Ensuite, le canal est ouvert mais la différence de potentiel étant inférieure au potentiel d'équilibre de l'ion, le flux diffusif est supérieur au flux de migration électrique. Le courant est alors dans le sens du flux diffusif, c-à-d entrant.
Ensuite le canal est ouvert grâce à une différence de potentiel égal au potentiel d'équilibre de l'ion. Le flux diffusif est égal au flux de migration électrique. Le courant I est nul.
Enfin, le canal est ouvert mais la différence de potentiel est supérieure au potentiel d'équilibre de l'ion. Le flux de migration électrique devient alors plus grand que le flux diffusif. Le courant est alors dans le sens du flux de migration électrique, il devient sortant.
Responsable matière UE3 bis à la retraite
"Les voyages forment la jeunesse"
<p style="text-align:right;">- Une cellule dendritique.
Bonsoir Amy vous êtes une chef. Mais j’ai encore quelque difficulté à tout saison du voltage clamp. D’abord je ne comprends pas ce qu’est le courant capacitif au sein de la membrane. Ensuite lorsqu’on mesure une perméabilité selon le Vm de la membrane, on devrait alors choisir un type de canal par mesure et inhiber pharmacologique lent les autres non? Ça me semble semble ment confus je bloque sur ca! Si vous pouviez expliquer toute l’experience Comme vous l’avez fait avec le patch clamp je vous en serais énormément reconnaissance.