Clonage gene

[ElGuapeton]

Salut !
 
Quelle est la différence entre le clonage à partir d'une banque de gène et à partir de la PCR ?
 
Comment fonctionnent chacune des techniques?
 
Merci d'avance 

[Marcoo]

Alors:
Banque de gène:
-On prends un plasmide et on introduit grâce a des enzymes de restriction notre ADN a amplifier. (Il faut que dans ce plasmide il y ait un gène de résistance à un antibiotique).
-On introduit ce plasmide dans des bactéries (dans la pratique on ne peut pas introduire le plasmide  dans chaque bactéries une à une, compliqué à l’échelle du micromètre). dans la solution de bactérie + plasmide certaines bactéries vont intégrer dans leurs cytoplasmes le plasmide et d'autre non. 
-On expose cette solution à un antibiotique et toutes les bactéries qui ne possèdent pas le plasmide meurent (les survivantes sont encore la grâce au plasmide avec son gènes de résistances aux antibiotiques) 
-Ensuite on incube les bactéries restantes et elles vont faire leurs petites vie tranquille. Entre temps le plasmide à l'intérieur des bactérie se divise ainsi que les bactéries. 
-Nous avons à la fin plusieurs milliers de bactéries qui se divisent et nous savons quelles possèdent toutes l'ADN d'interet 
 
Voila après avec la PCR je n'ai pas trop compris aussi ... 

[ElGuapeton]

c'est pas grave 
 
super merci !

[Mimi Du tiek]

<p style="color:rgb(90,90,90);font-family:helvetica, arial, sans-serif;font-size:13px;">Hello, la PCR permet l'amplification en très grande quantité d'une région d'intérêt (L'ADN du patient étant en faible quantité),  
<p style="color:rgb(90,90,90);font-family:helvetica, arial, sans-serif;font-size:13px;"> 
<p style="color:rgb(90,90,90);font-family:helvetica, arial, sans-serif;font-size:13px;">C'est également une méthode de clonage qui te permettra à partir d'un petit échantillon d'ADN, d'avoir de nombreuses copies identiques de cette séquence.
<p style="color:rgb(90,90,90);font-family:helvetica, arial, sans-serif;font-size:13px;">Tu peux effectuer une PCR sur sur L'ADN et sur ARNm.
<p style="color:rgb(90,90,90);font-family:helvetica, arial, sans-serif;font-size:13px;"> 
<p style="color:rgb(90,90,90);font-family:helvetica, arial, sans-serif;font-size:13px;">Une fois que tes clones sont produits par PCR, tu les inseres dans tes plasmides par ligation. Après transformation tu obtiens ton gène cloné

[ElGuapeton]

Merciiii
 
Mais du coup il y a une différence entre amplification et clonage ?

[Mimi Du tiek]

[quote="Newbie"]
Merciiii
 
Mais du coup il y a une différence entre amplification et clonage ?
[/quote]
En fait c'est deux méthodes qui sont complémentaires : la PCR amplifie ta séquence d'intérêt que tu vas ensuite cloner dans un vecteur (le plasmide ici), le vecteur va exprimé la séquence d'intérêt et tu pourras alors l'utiliser  

[ElGuapeton]

ok merci bcp