Cours simple mais dur ;(

[Impératrice élise]

Bonjour, j'ai besoin de votre aide svp :


p.2 : pk disons-nous que l'hybridation permet d'identifier des gènes ou des arn car de base on a un gène donc il devrait être complémentaire à un autre gène,non ?




P.3 : phage = virus pour les bactéries <= juste avant on dit que virus = vecteur des cellules mammifères

[elian_suffren]

Salut, je vais essayer de t'expliquer tout ca! 
 
[quote="Impératrice élise"]
p.2 : pk disons-nous que l'hybridation permet d'identifier des gènes ou des arn car de base on a un gène donc il devrait être complémentaire à un autre gène,non ?
[/quote]
L'hybridation permet de visualiser du matériel génétique en général, donc ca comprend l'ARN, l'ADN, etc
 
 
[quote="Impératrice élise"]
P.3 : phage = virus pour les bactéries <= juste avant on dit que virus = vecteur des cellules mammifères
[/quote]
En fait tu va avoir les virus "normaux" qui vont infecter les cellules eucaryotes (pas nécessairement mammifère attention), et les virus qui s'attaquent aux cellules procaryotes (donc aux bactéries) sont appelées les phages
 
 
[quote="Impératrice élise"]
P.6 : l'ADN = 46 k. Donc quand on dit " les molécules d'ADN à réplication autonomes se situent à côté des k." Je suis perdu
[/quote]
En fait il y a les molécules d'ADN de nos chromosomes qui se répliquent selon certains signaux etc, et les molécule d'ADN dits "a réplication autonome" se répliquent "tout seuls" (logique du coup). Sauf que pour pouvoir se répliquer, ils se placent à coté de nos chromosomes pour bénéficier des enzymes de réplication qui sont dans le coin.
 
 
[quote="Impératrice élise"]
P.6 : " sites de restriction uniques " <=> nécessaires au clonage . Mais pour moi vu qu'on utilise des enzymes de restriction pour détruirent les phages, ça veut dire qu'on attaque à cet endroit là ? Donc c'est plutôt négative ces sites de restriction , non ?
[/quote]
Le mécanisme de clonage fait intervenir des plasmides, qui sont des vecteurs tout petit. Donc on utilise les enzymes de restriction pour découper notre gène en petit bout afin qu'ils rentrent dans nos plasmides. Pour les phages, ces memes enzymes servent aussi à découper le phage mais pour l'inactiver cette fois.
 
 
[quote="Impératrice élise"]
P.9 : pk " une cellule qui ne se divise pas, ne peut pas être infectée par un rétrovirus " ?


Et les rétrovirus / lentivirus/ adenovirus/AAV/liposomes sont les vecteurs des cellules mammifères ? Ce sont les équivalents des plasmides/ cosmides / phages , pour les bactéries ?
[/quote]
1/ Les rétrovirus fonctionnent en se couplant à la reverse transcriptase, une enzyme utilisée lors de la réplication et donc de la division cellulaire. Une cellule qui ne se divise pas comme un neurone n'utilise pas de reverse transcriptase donc ton rétrovirus ne va pas pouvoir fonctionner.
 
2/ C'est presque exact, c'est juste pas les cellules mammifères mais les cellules eucaryotes (ce n'est pas exactement pareil attention!)
 
 
[quote="Impératrice élise"]
P.10 : grosso modo , l'adénovirus c'est qlq chose de délétère pour la cellule dans laquelle il s'insère à cause des séquences E1A , E1B et E3 mais lorsqu'on les remplace par notre gène, bn là ça devient qlq chose de cool ?
[/quote]
Comme les autres virus qu'on utilise, à la base ils sont fait pour infecter nos cellules avec une action plus ou moins délétère oui. Mais en remplacant les régions E1A, E1B, E3 par notre gène d'intéret, on va enlever cette action délétère pour pouvoir introduire notre gène dans la cellule.
 
Pour les autres types c'est le meme principe, c'est juste pas les memes régions (rétrovirus et lentivirus c'est GAG, POL, ENV; Adéno-aciocated virus c'est REP et CAP)
 
 
[quote="Impératrice élise"]
P.10 : " peu d'insertion dans le génome car les ITR sont bcp moins efficaces que les LTR" je croyais que les adenovirus ne s'intégraient pas du tout dans le génome , donc au final si ? Mais juste un peu ?
[/quote]
ils s'intègrent quand meme un peu, mais c'est tellement une part insignifiante que lors de la réplication à un moment on va le perdre totalement.
 
 
[quote="Impératrice élise"]
P.15 : en ft pour cloner un gène , on utilise soit une banque soit la PCR mais du coup pour la banque je comprend pas pk elle a déjà des millions de gènes ni pk à la page 16 on dit sur le schéma " original " et réplique " ?


Et pour la PCR en gros il faut connaître la séquence d'ADN complète mais je ne comprend pas pk on dit " on amplifie seule la région que l'on souhaite " donc au final on prend juste un bout de l'ADN auquel on ajoute à l'extrémité 3' une adenine qui sera complémentaire de l'ADN du plasmide qui lui contient un T a son extrémité 3' et là on aura clonage ?
[/quote]
1/la banque n'est pas composée de gènes mais de bactéries! ensuite sur le shéma on t'explique qu'on prend la boite originale, on fait une "copie" en déposant un filtre dessus. Les bactéries vont donc se transférer en partie sur le filtre, et en partie rester dans la boite. Ensuite on doit faire certains procédés qui vont tuer les bactéries, donc on peut pas le faire sur notre banque originale, c'est pour ca qu'on le fait sur la copie. Une fois qu'on a enlevé les bactéries mortes, on regarde celles qui reste et on le compare avec notre banque originale. Comme la réplique a conservé les positions exactes des bactéries, on est cabable de les superposer pour savoir exactement la position des bactéries qu'on recherche dans notre banque. On pourra donc les récupérer et les répliquer.
 
2/Le clonage à l'aide de la PCR est "plus simple", mais l'inconvénient c'est qu'on doit connaitre la séquence entiere de ce qu'on veut isoler. L'avantage par contre c'est que comme on connait la séquence exacte on est capable de sélectionner seulement la partie qui nous intéresse , et on peut donc répliquer le petit bout qui nous intéresse sans s'embêter avec toute la séquence.
Pour l'histoire du A en +, c'est une particularité de la TAQ polymérase, et ca va permettre au vecteur s'il se termine par T d'accepter la séquence. Mais ca ne suffit pas du tout a faire le clonage, ca permet juste de faciliter l'utilisation du vecteur.
 
 
[quote="Impératrice élise"]
P.15 : pk le clonage permet de mettre un gène étranger dans un vecteur ? Ce n'est pas justement lorsqu'on introduit un gène dans un vecteur que le tout sera cloné ? Quelle est l'intérêt du coup ? Et pk une bactérie ne peut recevoir qu'un seul adn recombinant ?
[/quote]
En fait on va cloner notre gène in vitro, et le vecteur va permettre de l'introduire in vivo pour qu'il ai un effet. Seulement on est obligé de le cloner pour en avoir des milliers car on ne peut pas faire ca avec 1 seul vecteur et 1 seul gène a chaque fois, ce serait trop compliqué et il y a toujours une chance que ca ne marche pas. Du coup on le fait des milliers de fois (d'ou l'interet du clonage) comme ca on est sur que ca marche.
 
Et pour les bactéries tu dois retenir que c'est plein d'inconvénient, comme par exemple le fait qu'on doit la tuer pour récupérer nos protéines répliquées. Si on a plusieurs types d'ADN recombinant, on aura trop de protéines et pour trier c'est trop compliqué.
 
 
Ouf j'arrive au bout de tes questions   j'espère que j'ai été clair, si tu as encore des questions n'hésite surtout pas